Quick-Zol ARN extraction
Reactivo para extracción ARN total a partir de células y tejidos (sólidos o líquidos). Quick-Zol está optimizado para la obtención de ARN celular de gran integridad y pureza, libre de contaminación de DNA y proteínas. El ARN purificado puede ser utilizado para estudios de Northern blot, poly (A)+ selection, traducción in vitro, RNAse protection y clonado, entre otros.
El método completo puede ser llevado a cabo en una hora. Está optimizado tanto para pequeñas cantidades de material de partida (50-100 mg de tejido y 1×106 células) como para cantidades mayores (≥1 g de tejido y >107 células).
Conservación: Almacenar entre 4ºC y 25ºC y al abrigo de la luz.
Sólo aplicable a investigación y desarrollo.
Presentación: 100 ml
Protocolo de extracción de RNA:
1- Homogenización.
Homogeneizar las muestras en 1 ml de Quick-Zol por cada 50-100 mg de tejido. Utilizar homogeneizador de Teflon o equivalente. El volúmen de tejido no debe exceder el 10% del volumen de Quick-Zol utilizado para la extracción.
2- Separación de las fases
Incubar la muestra homogenizada durante 5 minutos a temperatura ambiente, lo que permite la disociación completa de los complejos núcleo-proteicos. Añadir 0,2 ml de cloroformo por cada ml de Quick-Zol.
Agitar los tubos durante 15 segs e incubarlos a temperatura ambiente por 2 a 3 minutos. Centrifugar las muestras a 12,000xg durante 10 minutos a 4°C.
Luego de centrifugar la mezcla tomar la fase superior donde se encuentra el ARN.
Si observa mucha interfase repetir esta etapa de extracción.
3- Precipitación del RNA.
Transferir la fase acuosa a un tubo nuevo. Precipitar el RNA de la fase acuosa con 0,5 ml alcohol isopropilico por cada ml de QuickZol usado en la homogenización inicial. Centrifugar a 12,000xg durante 10 minutos a 4°C. El precipitado de RNA, generalmente invisible, forma un pellet en la base del tubo.
3- Lavado del RNA.
Remover el sobrenadante y lavar el pellet de ARN con 1 ml de etanol al 75% por cada ml de Quick-Zol. Centrifugar a 12000xg durante 5 minutos a 4°C.
4- Redisolución del RNA.
Secar brevemente el pellet de RNA (al aire por 5 minutos). Es importante no secar completamente el pellet ya que esto provoca la disminución de su solubilidad. Disolver las muestras de RNA en 25 ul de agua libre de RNasa. Conservar la muestra a –70°C.
5- Cuantificación
Cuantificar el ARN por espectrofotometría a 260 nm.